前言：抗原修復是組織切片進行免疫組化染色前的處理，這個環節是必不可少的。這里就來詳細介紹一下抗原修復，小站網羅了兩本書的內容，為的是更加全面詳細的了解抗原修復的目的和各種方法，僅供參考。
先了解抗原熱修復的目的
由于病理組織學常規使用的甲醛固定劑可以造成蛋白質交聯，即在氨基酸分子間形成亞甲基橋，從而造成部分或大部分抗原結合位點（抗原決定簇）的封閉。通過抗原熱修復可以有效地使抗原結合位點重新暴露（見上圖）。
抗原熱修復的方法
1、水浴法
水浴抗原修復方法是在恒溫水浴設備中進行抗原熱修復的技術（圖10-4-4）。
具體方法 |
1）將盛有抗原修復液的燒杯置入水浴設備中，加熱至95~99°℃。 2）將脫蠟至蒸餾水的切片置入抗原修復液中，加熱處理15~25min。 3）將燒杯連同抗原修復液和被修復的組織切片一起置入冷水中進行隔水降溫至室溫。 4）PBS洗3min進行后續免疫組織化學染色。 |
水浴抗原修復方法的優點是技術方法穩定作用溫和及不易脫片，但是一般認為其抗原修復效果低于高壓法，建議采用該方法進行抗原修復時最好使用高pH值的抗原修復液。
2、高壓法
高壓抗原修復方法是利用高壓鍋進行抗原熱修復的技術（圖10-4-5）。
具體方法 |
1）將盛有抗原修復液的高壓鍋在電磁爐上加熱至沸騰。 2）將脫蠟至蒸餾水的切片置入抗原修復液中加蓋進行熱處理。當高壓鍋氣閥噴氣后計時2.5~3min。 3）將高壓鍋置入冷水降至室溫取出切片。 4）PBS洗3min進行后續免疫組織化學染色。 |
高壓抗原修復方法的優點是暴露抗原決定簇的效果較好，但易于造成組織切片的脫落。在免疫組織化學染色實踐中發現使用高壓法進行抗原熱修復有修復過度造成背景染色的現象，建議使用該方法進行抗原修復時，如非必要應避免使用高pH值的抗原修復液。
3、微波法
微波抗原修復法是較早采用的抗原修復技術方法。
具體方法 |
1）將脫蠟至水后的組織切片置入盛有抗原修復液的容器中。 2）將容器置入微波爐內高檔加熱至修復液沸騰。 3）將微波爐調至低檔維持加熱10min。 4）將容器連同修復液和切片移出微波爐降至室溫。 5）PBS洗3min進行免疫組化染色。 |
微波修復方法雖然能夠達到抗原修復的目的，但是由于微波爐的型號和功率不同，修復的穩定性較差，在使用中應根據所用微波爐的具體情況摸索以掌握規律。微波抗原修復的另一個問題是，在同時修復的組織切片中以及在同一切片的不同部位可能出現修復效果不均勻的現象。
抗原修復液
不同類型的抗原決定簇在不同pH值的抗原修復液中修復的效果不同，因此在免疫組化染色中應根據實踐經驗選用不同的抗原修復液進行抗原修復。
目前常用的抗原修復液主要有：
①pH 6.0 檸檬酸抗原修復液。
②pH 8.0 EDTA抗原修復液。
③pH 9.0 Tris-EDTA抗原修復液。
針對某種抗體的免疫組化染色，在抗原修復液的選擇上目前通行的觀點是，采用高壓修復方法時最好首選pH6.0檸檬酸抗原修復液進行抗原修復，在修復效果不理想的情況下再選用pH9.0 Tris-EDTA抗原修復液。在采用水浴修復方法時則首選pH 9.0 Tris-EDTA抗原修復液，如果修復效果不理想或染色背景偏高，再選用pH6.0檸檬酸抗原修復液進行試驗。
以上如果是理論性的知識和方法的話，下面絕對是可操作性和實用性強的內容，病理學方法學最詳細的還得是產品說明，先來個導圖總覽一下。
具體詳細內容如下：
抗原熱修復方法
1、EDTA直接煮沸抗原修復法
儀器設備 |
不銹鋼鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐（120~2000W，可調節加熱功率和時間） |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（EDTA法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）取適量已稀釋成工作液的EDTA 抗原修復液于不銹鋼鍋中，將不銹鋼鍋放置于電磁爐上，大功率加熱至沸騰； 3）將功率調至最小（處于保溫狀態），將切片置于耐高溫染色架上，放入已沸騰的修復液中，蓋上鍋蓋，繼續加熱20分鐘； 4）將不銹鋼鍋離開電磁爐，室溫自然冷卻10分鐘后，可用流水在不銹鋼鍋外壁沖淋加速鍋內修復液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，流水沖洗干凈； 5）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗2×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
2、EDTA高溫高壓抗原修復法
儀器設備 |
不銹鋼壓力鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐（120~2000W，可調節加熱功率和時間） |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（EDTA法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）取適量已稀釋成工作液的EDTA抗原修復液（800~1500mL）于壓力鍋中，將壓力鍋放置于電磁爐上，大功率加熱至沸騰； 3）將功率調至中度（800~1000W），將切片置于耐高溫染色架上，放入已沸騰的修復液中，蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續加熱； 4）當壓力閥開始噴氣時計時1.5~2分鐘，然后將壓力鍋離開電磁爐，室溫自然冷卻10分鐘后，可用流水在壓力鍋外壁沖淋加速鍋內修復液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，流水沖洗干凈； 5）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗2×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
3、檸檬酸高溫高壓抗原修復法
儀器設備 |
不銹鋼壓力鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐（120~2000W，可調節加熱功率和時間）
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所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（檸檬酸法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）取適量已稀釋成工作液的檸檬酸抗原修復液（800~1500mL）于壓力鍋中，將壓力鍋放置于電磁爐上，大功率加熱至沸騰； 3）將功率調至中度（800~1000W），將切片置于耐高溫染色架上，放入已沸騰的修復液中，蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續加熱； 4）當壓力閥開始噴氣時計時1.5~2分鐘，然后將壓力鍋離開電磁爐，室溫自然冷卻10分鐘后，可用流水在壓力鍋外壁沖淋加速鍋內修復液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，流水沖洗干凈； 5）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗2×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
4、檸檬酸直接煮沸抗原修復法
儀器設備 |
不銹鋼鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐（120~2000W，可調節加熱功率和時間） |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（檸檬酸法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）取適量已稀釋成工作液的檸檬酸抗原修復液于不銹鋼鍋中，將不銹鋼鍋放置于電磁爐上，大功率加熱至沸騰； 3）將功率調至最小（處于保溫狀態），將切片置于耐高溫染色架上，放入已沸騰的修復液中，蓋上鍋蓋，繼續加熱20分鐘； 4）將不銹鋼鍋離開電磁爐，室溫自然冷卻10分鐘后，可用流水在不銹鋼鍋外壁沖淋加速鍋內修復液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，流水沖洗干凈； 5）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗2×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
【抗原熱修復方法注意事項】
1、不能使用銅染色架和鋁鍋，防止因修復液pH值改變而影響抗原修復效果；
2、修復結束后建議等修復液冷卻后再將切片取出，建議采取平緩的冷卻方式，而不是迅速冷卻，迅速冷卻容易造成抗原暴露不充分或組織脫片，若采取迅速冷卻的方式務必要適當延長修復時間（根據實驗室自身情況進行調整），取出后的切片需要用流水充分洗滌，不然會對后續免疫組化染色結果造成不良影響；
3、為防止組織脫落，載玻片必須經過防脫處理后方可使用；
4、修復液的量必須保證切片中的組織始終能浸泡在修復液中；
5、修復時間可根據各實驗室自身情況作相應調整。
抗原酶消化修復方法
1、胰酶消化抗原修復法
儀器設備 |
電熱恒溫干燥箱、孵育盒 |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（胰酶法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗3×3分鐘； 3）除去PBS，切片上滴加適量已稀釋成工作液的胰酶溶液； 4）將切片放入已提前預熱至37°℃的孵育盒中孵育15分鐘，PBS沖洗3×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
2、胃酶消化抗原修復法
儀器設備 |
電熱恒溫干燥箱、孵育盒 |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（胃酶法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗3×3分鐘； 3）除去PBS，切片上滴加適量胃酶溶液； 4）將切片放入已提前預熱至37°℃的孵育盒中孵育30分鐘，PBS沖洗3×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
【抗原酶消化修復方法注意事項】
1、為防止組織脫落，載玻片必須經過防脫處理后方可使用；
2、抗原修復必須在37℃下進行，孵育盒需要加入少量水并提前進行37℃預熱。
抗原雙修復方法
抗原雙修復（胰酶+檸檬酸）方法
儀器設備 |
不銹鋼壓力鍋，耐高溫塑料染色架，電磁爐（120~2000W，可調節加熱功率和時間），電熱恒溫干燥箱、孵育盒 |
所需試劑 |
免疫組化抗原修復緩沖液（檸檬酸法），免疫組化抗原修復緩沖液（胰酶法），蒸餾水，PBS磷酸鹽緩沖液 |
操作步驟 |
1）石蠟切片脫蠟、水化，流水沖洗并浸泡于水中待用； 2）建議除去切片組織外的水分，在離組織3mm處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗3×3分鐘； 3）除去PBS，切片上滴加適量已稀釋成工作液的胰酶溶液，將切片放入已提前預熱至37℃的孵育盒中孵育15分鐘，流水沖洗并浸泡于水中待用； 4）取適量已稀釋成工作液的檸檬酸抗原修復液（800~1500mL）于壓力鍋中，將壓力鍋放置于電磁爐上，大功率加熱至沸騰； 5）將功率調至中度（800~1000W），將切片置于耐高溫染色架上，放入已沸騰的修復液中，蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續加熱； 6）當壓力閥開始噴氣時計時1.5~2分鐘，然后將壓力鍋離開電磁爐，室溫自然冷卻10分鐘后，可用流水在壓力鍋外壁沖淋加速鍋內修復液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，流水沖洗干凈，PBS沖洗2×3分鐘，之后按照相關檢測試劑盒的操作步驟執行。 |
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